Μελέτη απομονώσεως του βακτηρίου Clavibacter Michiganensis Subsp. Michiganensis παθογόνου αίτιου του βακτηριακού έλκους της τομάτας κατά το διάστημα 2010-2013.

Abstract

Το «βακτηριακό έλκος» αποτελεί μία από τις πιο σοβαρές ασθένειες που αντιμετωπίζει η τομάτα σήμερα. Πρόκειται για μία πολύ σοβαρή αδροβακτηρίωση η οποία περιγράφηκε για πρώτη φορά στις ΗΠΑ το 1909 ενώ στην Ελλάδα διαπιστώθηκε για πρώτη φορά το 1958 στην περιοχή της Πρέβεζας και έκτοτε έχει εξαπλωθεί σε όλη τη χώρα. Οι προσβολές της ασθένειας μπορεί να είναι διασυστηματικές και τοπικές και τα συμπτώματα που προκαλούν είναι: η μάρανση με μορφή ημιπληγίας στα φύλλα, κίτρινος μέχρι καστανός μεταχρωματισμός των αγγείων του βλαστού, επιμήκη ανοικτά έλκη στους βλαστούς, κ.α. Το Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis είναι το παθογόνο αίτιο αυτής της ασθένειας το οποίο είναι ένα κορυνόμορφο βακτήριο, θετικό κατά Gram, δεν έχει αυτόνομη κίνηση, παρουσιάζει αργή ανάπτυξη και οι αποικίες που σχηματίζει έχουν ανοιχτό κίτρινο χρώμα. Στη μελέτη αυτή αναλύονται βακτηριακά στελέχη του Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis που υπήρχαν στη συλλογή του εργαστηρίου Βακτηριολογίας του ΤΕΙ Κρήτης και που έχουν προέλθει από διάφορες περιοχές της Ελλάδας κατά το χρονικό διάστημα 2010 έως 2013 καθώς και στελέχη που απομονώθηκαν στη διάρκεια του πειράματος. Σκοπός της εργασίας αυτής είναι να γίνει μελέτη του φαινοτυπικού τους προφίλ αλλά και ο έλεγχος της παθογένεια τους με τεχνητές μολύνσεις σε φυτά τομάτας. Περαιτέρω θα εφαρμοστεί η τεχνική του έμμεσου ανοσοφθορισμού για την ανίχνευση των βακτηριακών κυττάρων. Τέλος θα προχωρήσουμε σε μοριακή ταυτοποίηση των απομονώσεων με μεθοδολογίες όπως η PCR με την χρήση εξειδικευμένων, για το συγκεκριμένο βακτήριο, εκκινητών (CMM5/CMM6 και PSA-4/PSA-R).

Bacterial canker of tomato, caused by the bacterium, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, is one of the most important diseases of tomato. In recent years, serious outbreaks were occurred in greenhouses and open field tomato cultures in Greece, causing losses estimated up to 80%. The aim of this work was to study isolates of the pathogen collected over the last 20 years from various locations in Greece. Isolates were characterized by morphological, biochemical, serological and molecular approaches. Their pathogenicity was re-evaluated by their ability to provoke hypersensitivity reaction in leaves of four o'clock plants (Miriabilis jalapa L.) and artificial infection of tomato plants. The 40 isolates analyzed did not differ in respect to growth on nutrient media (NA and m-SCM) and all of them were found positive in gelatin hydrolysis, production of H2S, utilization of Na-citrate and negative in the hydrolysis of starch. All strains were strong positive in serological tests using the specific antiserum (anti-Clav782) while they produced the expected band (270bp) in PCR tests with the PSA-4/PSA-R pair. Finally, the diversity among the strains was evaluated by the utilization of ΒΟΧ-PCR fingerprinting with the produced dendrogram delineating the genetic diversity among the isolates.